新闻&促销

当前位置:首页> 新闻&促销

细胞培养直播课

发布时间 2020年08月25日 | 活动时间 2020年08月28日-2020年08月28日

摘要:

干货 | 搞懂20问,轻松养细胞

01

冷冻管应如何解冻?

答:取出冷冻管后,须立即放入37°C 水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化,并注意水面不可超过冷冻管盖沿,否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时,必须注意安全,预防冷冻管之爆裂。


02

细胞冷冻管解冻培养时,是否应马上去除DMSO?

答:除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外,绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞),在解冻之后,应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中,待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可,如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。


03

可否使用与原先培养条件不同之培养基?

答:不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活。


04

可否使用与原先培养条件不同之血清种类?

答:不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源, 所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清, 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。


05

何谓FBS, FCS, CS, HS ?

答:FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思,两者都是指胎牛血清,FCS 乃错误的使用字眼,请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。


06

培养细胞时应使用5%或10%CO2?或根本没有影响?

答:一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统, 而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时,细胞培养时应使10%CO2;当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时,则应使用5%CO2培养细胞。


07

何时须更换培养基?

答:视细胞生长密度而定,或遵照细胞株基本数据上之更换时间,按时更换培养基即可。


08

如何进行细胞身份检测,判定细胞为正确细胞?

答:1) STR分型:基于多重PCR、同时扩增基因组中多态STR位点的技术鉴定人类和小鼠细胞系;
2) DNA条码:基于PCR和测序的CO1条码分析技术鉴定非人类细胞系;
3) 全基因组测序:能够鉴定种间和种内污染。


09

附着性细胞传代时所使用之trypsin-EDTA浓度?应如何处理?

答:一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.25%trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中,保存于–20°C,避免反复冷冻解冻造成trypsin之活性降低,并可减少污染之机会。


10

悬浮性细胞应如何继代处理?

答:一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中,稀释细胞浓度即可, 若培养液太多时,可将培养角瓶口端稍微抬高,直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶, 加入新鲜培养基稀释至适当浓度,重复前述步骤即可。


11

欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速?

答:欲回收动物细胞,其离心速率一般为300xg (约1,000rpm),5 - 10分钟,过高之转速,将造成细胞死亡。


12

细胞之接种密度为何? 

答:依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。


13

细胞冻存液成分为何?

答:细胞冻存液成分为10%的DMSO和90%胎牛血清均匀混合。注意:由于DMSO稀释时会放出大量热能,故不可将DMSO直接加入细胞液中,必须使用前先行配制完成。


14

DMSO 之等级和无菌过滤之方式为何?

答:冷冻保存使用之DMSO 等级,必须为Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650),其本身即为无菌状况, 第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中,保存于4°C,避免反复冷冻解冻造成DMSO 之裂解而释出有害物质,并可减少污染之机会。若要过滤DMSO, 则须使用耐DMSO 之Nylon 材质滤膜。


15

冷冻保存细胞之方法?

答:冷冻保存方法一: 冷冻管置于4°C30~60 分钟→ (-20°C30 分钟*) → -80°C 16~18小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C 至–80°C 以下,再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20°C 不可超过1小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中,惟存活率稍微降低一些。


16

细胞欲冷冻保存时, 细胞冷冻管内应有多少细胞浓度?

答:冷冻管内细胞数目一般为1x106cells/ml vial,融合瘤细胞则以5x106 cells/ml vial为宜。


17

应如何避免细胞污染?

答:细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。


18

如果细胞发生微生物污染时,应如何处理?

答:直接灭菌后丢弃之。


19

支原体(mycoplasma) 污染的细胞, 是否能以肉眼观察出异状?

答:不能。除极有经验之专家外,大多数遭受支原体污染的细胞株,无法以其外观分辨之。


20

支原体污染会对细胞培养有何影响?

答:支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数, 代谢及研究之任一数据。故进行实验前,必须确认细胞为mycoplasma-free,实验结果之数据方有意义。



养细胞,进实验室的必备技能之一

不过,细胞一向身娇体弱

要将其真正养好,也十分不易

8月28日上午10点

请锁定《博士德细胞培养实验课堂》

看看资深细胞培养实验专家

如何为您全面解读细胞培养技术

扫一扫海报中二维码

快来免费报名参与吧~