产品中心

当前位置:首页>产品中心 >免疫印迹检测系统 >蛋白检测

Western Blotting DAB 显色法检测试剂盒(蓝色)(兔IgG)

显色试剂盒

分类:

免疫印迹检测系统 - 蛋白检测

说明书:

LOGO.jpg
  • LOGO.jpg

SA2025

420元/Kit  

WB

WB辅助试剂

现货

选择规格:

总价格:

---元*1

选择数量:

- +

Product Brief

  • 产品概况

    产品货号SA2025(适于一抗为兔多克隆抗体)
    价格规格¥420/盒
    工作原理聚合标记法是武汉博士德生物工程有限公司独创的一种酶标记方法,其敏感性比普通酶标法有明显提高。用于Western Blotting 的免疫学检测,更能体现其优点。不仅能大量地节约一抗,更重要的是使条带更清晰,甚至能检测出普通酶标法无法检测出的微量条带。DAB 是过氧化物酶最重要的显色剂之一,反应产物为不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物,适合于免疫印迹的显色反应。本产品采用特殊配方,具有操作简单,储存稳定,信号灵敏度高,持续时间长,背景低,结果易保存等优点。
    保存条件-20℃冷冻保存。DAB 显色试剂应避光保存。
    有效期一年。
    试剂盒的内容(1)封闭试剂:10 g蛋白干粉×1包。
    (2)浓缩抗体稀释液:20 ml×1瓶,为10倍浓缩液。
    (3)过氧化物酶标记山羊抗兔IgG,效价1:200-400。
    (4)DAB显色试剂,含
    显色剂A:DAB×40倍浓缩液,3ml。
    显色剂B:H2O2×40倍浓缩液,3ml。
    显色剂C:×40倍TBS浓缩缓冲液(含氯化镍),3ml。


Instructions

需要而未提供的试剂和器材:
1. 转印了蛋白样品的NC 膜或PVDF 膜:通过SDS-PAGE 凝胶电泳分离蛋白质抗原,将PAG 胶上的蛋白质转印到硝酸纤维素膜(NC 膜)或PVDF 膜上。
2. 稀释缓冲液:使用中性稀释缓冲液即0.02 M PBS(AR0030)或0.02 M TBS(AR0144)配制封闭液和抗体稀释液。0.02 M PBS(pH7.2-7.6):1000 ml 蒸馏水加Na2HPO4 2.8 g ,NaH2PO4 0.4 g,NaCl 8.5 g。如果用的是含水磷酸盐,应加上分子式中水的含量。0.02M TBS (pH7.2-7.6):1000ml 蒸馏水中加Tris 2.42g, NaCl 9g; 纯乙酸或浓盐酸调节pH 值(7.2-7.6)。
3. 洗涤缓冲液:每1000ml 中性稀释缓冲液中加入0.5 ml Tween20 即可。
4. 一抗:选择适合的一抗,用抗体稀释液稀释相应的一抗,一般特异性抗体工作浓度为1μg/ml, 具体的稀释度取决于特异性的一抗和膜上的抗原的量。
5. 摇床:膜的封闭、抗体孵育和洗涤都需平稳摇晃,需在摇床上操作。
6. 相机:记录结果。
操作程序:
1. 通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白样本和分子量标准。
2. 将蛋白样本转移至硝酸纤维素膜或PVDF 膜上。
3. 封闭硝酸纤维膜:用封闭蛋白干粉2 g, 加稀释缓冲液100 ml,20-37 ℃封闭1-2 小时。用量以浸没整张膜为准。
4. 用洗涤缓冲液洗涤硝酸纤维素膜5 分钟, 1 次。
5. 配制抗体稀释液:取90 ml 稀释缓冲液加1 g 封闭蛋白干粉和10 ml 浓缩抗体稀释液即可。一抗、二抗均用此稀释液稀释。
6. 硝酸纤维膜孵育一抗:用抗体稀释液稀释相应的一抗,一般特异性抗体浓度1μg/ml,20-37 ℃孵育2小时左右。如果缺乏特异性的条带或阳性不强,应提高一抗的浓度;如果有非特异性的条带,应提高一抗的稀释度。
7. 用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维素膜3 次, 每次5 分钟。
8. 硝酸纤维膜孵育二抗:用抗体稀释液稀释相应的酶标二抗,效价1:200-400。37 ℃孵育一个半小时左右。用户可根据实际染色情况对稀释度做适当调整。
9. 用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维膜4 次, 每次5 分钟。
10. DAB 显色:使用DAB 显色试剂。按每2 ml 蒸馏水加显色剂A,B,C 各1滴,混匀。混匀后加至膜上。室温显色。一般显色1-30 分钟。若无背景出现则可继续显色。显色后用蒸馏水洗涤以终止反应。
11. 观察,照相。
备注:可访问博士德网站获取详细的Western blotting 流程及全套产品信息。
注意事项:
1. 试剂频繁使用时置4℃,不常使用时置-20℃。显色剂A 需置-20℃冷冻保存。如有结晶析出,应确保结晶完全溶解再行使用。
2. 显色工作液应新鲜配制。

Related products

暂无相关产品