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浓缩型SABC-DyLight 488(POD)(兔IgG)试剂盒

浓缩型SABC三步法试剂盒(荧光)

SA1033

520元/1/5 Kit  980元/2/5 Kit  2100元/1 Kit  

免疫荧光

浓缩型SABC三步法试剂盒(荧光)

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Product Brief

  • 产品概况

    产品货号SA1033
    产品名称浓缩型SABC-DyLight 488(POD)(兔IgG)试剂盒
    价格规格520元/1/5盒;980元/2/5盒;2100元/1盒
    保存条件4℃可保存一年,应避免冷冻。
    试剂盒内容1.正常山羊血清封闭液:5ml。用于组织切片的封闭。效价1:10。
    2.二抗:山羊抗兔IgG,0.5ml。亲和纯化抗体,标记长臂生物素。效价1:100。
    3.SABC-DyLight 488:0.5ml。采用博士德所研究的独特方法生产,复合物不仅有很强的信号放大作用,而且也非常稳定。效价1:200-800。
    4.SABC-POD:0.5ml。采用博士德所研究的独特方法生产,复合物不仅有很强的信号放大作用,而且也非常稳定。效价1:100。
    另有三个滴瓶供稀释试剂用。


Instructions

工作原理

SABC 是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质,分子量60000。同亲和素一样,对生物素分子有极高的亲和力,是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。等电点接近中性,这些特点使链霉亲和素的非特异吸附很低。因该方法的中心是StreptAvidin-Biotin-enzyme Complex,故命名为SABC。SABC 兼具高敏感性,低背景和操作简便的优点。免疫组化双显色试剂盒采用荧光素488+过氧化物酶POD 标记的链酶亲和素(SABC-DyLight 488+POD)。DyLight是一种近年来被广泛应用的新型荧光染料,由于具有很好的光谱宽度、更强的荧光强度,更高的光学耐受性(抗淬灭性)和特异性,对pH不敏感、分子较小而渗透性更好的优势,标记的抗体比Cy2和FITC标记的更亮,但背景更低。DyLight 488最大吸收峰 493nm;最大发射峰 518nm。呈黄绿色。加入显色底物DAB 显示后,染色呈棕黄色。用户根据实验需要,可在同一张切片上用两套显示系统观察。

使用说明

用户自备试剂:
1.粘片剂APES 或POLY-L-LYSINE(博士德公司有售)。
2.免疫组化专用PBS(pH7.2-7.6)配法:1000ml 蒸馏水中加氯化钠8.5g, Na2HPO4 2.8g,NaH2PO4 0.4g。如果用的是含水磷酸盐,应加上分子式中水的含量。
3.0.01M 枸橼酸盐缓冲液:1000ml 蒸馏水中加枸橼酸三钠(C6H5Na3O7·2H2O)3g, 枸橼酸(C6H8O7·H2O ) 0.4g。
4.DAB 显色试剂盒(博士德公司有售)。
免疫组化染色程序的选择:用户需根据抗原/抗体的特点确定程序,多数情况下要先比较各程序染色结果。
A 程序:石蜡切片热修复抗原程序。促进某些位于蛋白质内部的位点暴露。
B 程序:石蜡切片酶消化程序。促进某些被固定遮避的抗原位点暴露。
C 程序:石蜡切片不消化/不修复程序。适于稳定的抗原。
D 程序:细胞涂片,冰冻切片染色程序。
A.石蜡切片微波修复抗原染色程序:
1.载玻片防脱片剂处理:可选择APES 或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60 ℃30-60 分以使切片紧密粘附。
2.切片脱蜡至水。
3.蒸馏水新鲜配置3%H2O2,室温10 分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗2 分钟×3 次。
4.微波修复抗原:将切片浸入0.01M,PH6.0 柠檬酸盐缓冲液中,电炉或微波炉加热至沸腾后断电,循环2-3 次。冷却后进行下一步。
5.滴加用0.02M PBS 1:10 稀释正常山羊血清封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 不洗。
6.滴加适当稀释的一抗兔IgG,20-37 ℃ 1~2 小时或4℃过夜。0.02MPBS 洗2 分钟×3 次。(一抗的稀释度、孵育时间、温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)
7.配制二抗工作液:取1ml 0.02M PBS或TBS(PH7.2-7.6)加入生物素化山羊抗兔IgG 10μι, 混匀后加至切片。20-37℃20 分钟。0.02M PBS洗2 分钟×3 次。
8.配制SABC-DyLight 488或(SABC-POD)工作液:取2ml 0.02M PBS 或TBS(PH7.2-7.6)加入试剂SABC-DyLight 488或(SABC-POD)10μι,混匀后加至切片。20-37℃20 分钟。0.02M PBS 洗5 分钟×4 次。
9.DAB 显色:按100ml 0.02M PBS 或TBS 中加入最终浓度为25-50mgDAB,0.03%的H2O2。或使用DAB 显色试剂盒(AR1022)。取1ml 蒸馏水,加试剂盒中A,B,C 试剂各1 滴,混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间,一般5-30 分钟。蒸馏水洗涤。
10.苏木素轻度复染。0.02M PBS 或TBS(PH7.2-7.6)洗,蒸馏水洗。水溶性封片剂封片(可用甘油代替)。
B. 石蜡切片酶消化程序:
以下面的步骤代替A 程序中的第4 步:滴加复合消化液(博士德有售)5-10 分钟。蒸馏水洗3 次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。
C. 石蜡切片不消化/不修复程序:
对于不需要微波修复或消化的抗原,省略A 程序中的第4 步即可。
D.血涂片,细胞和冰冻切片染色程序:
1.载玻片经防脱片剂处理(Poly-L-Lysine)。抗凝血经分层离心后涂片;培养细胞也可涂片或贴片生长;冰冻切片室温风扇吹干。
2.固定方案首选4%多聚甲醛或10%福尔马林固定30 分钟。
3. 30%H2O2 1 份+纯甲醇50 份混合,室温浸泡30 分钟,以灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水洗1-2 次。其余步骤和石蜡切片5-10 步相同。
结果观察:
荧光显微镜下:有黄绿色颗粒者为阳性染色。
普通显微镜下:有棕黄色颗粒者为阳性染色。

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