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RIPA裂解液(弱)

蛋白抽提试剂

分类:

免疫印迹检测系统 - 蛋白抽提

说明书:

AR0108

38元/10ml  88元/30ml  198元/100ml  

WB

WB辅助试剂

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Product Brief

  • 产品概况

    产品货号AR0108
    产品名称RIPA裂解液(弱)
    价格规格¥38/10ml;¥88/30ml;¥198/100ml
    产品说明RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液,其主要成分含1% NP-40, 0.25% Sodium deoxycholate,裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于报告基因分析,Western,IP,Co-IP,蛋白纯化等。
    产品特点1.可用10克组织和5×108个细胞的提取。

    2.整个蛋白提取过程用时约60分钟。

    3.提取的为全蛋白,包括胞核,胞膜及胞浆蛋白。


Instructions

注意:取适当量的裂解液,放与4℃预冷,使用前数分钟内需加入酶抑制剂。

细胞样品:

1.对于贴壁细胞,去除培养液,用预冷的PBS洗一遍(可以直接将裂解液加入培养细胞的器皿中裂解细胞,对于不同规格标准培养板裂解液用量可见下表),并用细胞刮刮下细胞。3000g 离心5分钟收集细胞,尽量吸尽上清,加入适量的预冷的裂解液(5×106个细胞加入1ml的裂解液),用移液器吹打数下,冰上孵育30分钟, 14000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。

2.对于悬浮细胞,3000g 离心5min收集细胞,用预冷的PBS洗一遍, 3000g 离心5min收集细胞,尽量吸尽上清,加入适量的预冷的裂解液(5×106个细胞加入1ml的裂解液)。用移液器吹打数下,冰上孵育30分钟, 14000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。

板规格/表面积
试剂用量
100mm
500~1000ul
60mm
250~500ul
6-well plate
200~400ul per well
24-well plate
100~200ul per well
96-well plate
50~100ul per well

        

组织样品:

1.手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中,漂洗数次,洗净组织血迹,用滤纸吸干组织表面液体,将组织切成几个较小的组织块。 

2.称量组织,按组织净重(g):裂解液(ml)=1:10的比例,加入相应体积的的预冷的裂解液进行匀浆(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液, 如果需要高浓度的蛋白样品, 可以适当减少裂解液的用量) 。

注意:匀浆后肉眼观察应没有明显的组织小块。

3.冰上孵育30分钟。

4.14000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。

注意事项:

1.抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

2.裂解得到的蛋白样品,含有较高浓度的去垢剂,不建议用Bradford 法测定蛋白浓度,可以选用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。

注:裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NFKB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。


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