产品中心

当前位置:首页>产品中心 >免疫印迹检测系统 >蛋白抽提

增强型RIPA裂解液

蛋白抽提试剂,AR0102-10,AR0102-30,AR0102-100

分类:

免疫印迹检测系统 - 蛋白抽提

说明书:

AR0102

38元/10ml88元/30ml198元/100ml

WB

WB辅助试剂

现货

总价格:

---元*1

选择数量:

- +

Product Brief

  • 产品概况

    产品货号AR0102
    产品名称增强型RIPA裂解液
    价格规格¥38/10ml;¥88/30ml;¥198/100ml
    产品说明增强型RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液,其主要成分含1% NP-40, 1% Sodium deoxycholate, 0.1% SDS,适用于某些特殊的难裂解蛋白的抽提。裂解液裂解得 到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。裂解液不含蛋白酶或磷酸酶抑制剂,如果需 要,可将酶抑制剂添加到试剂中以防止蛋白质水解并维持蛋白质的磷酸化状态。
    材料需求

    蛋白酶和磷酸酶抑制剂

    2ml离心管

    组织研磨器

    能达到10000g的离心机

    细胞刮

    注意事项

    1.抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。 

    2.裂解得到的蛋白样品,含有较高浓度的去垢剂,不建议用Bradford 法测定蛋白浓度,可以选用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。 

    3.裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NFKB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。


Instructions

对于细胞:

注意:取适当量的裂解液,放与4℃预冷,使用前数分钟内需加入酶抑制剂。

1.  贴壁细胞细胞刮刮下细胞,计数,并收集5×106 个细胞,600g 离心5分钟,尽量吸尽上清,用预冷的PBS重悬细胞,600g 离心5分钟收集细胞,尽量吸尽上清,加入0.5ml的预冷的裂解液,用移液器吹打数下,冰上孵育30分钟, 10000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。

注意:可以直接将裂解液加入培养细胞的器皿中裂解细胞,具体操作如下,

A.用移液枪小心吸去培养液,

B.加入适量的预冷的PBS,

C.用移液枪小心吸去PBS,

D.按照下表加入裂解液,4℃孵育30分钟。

E.将裂解液转入离心管中, 10000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。

板规格/表面积

试剂用量

100mm                      

500~1000ul

60mm

250~500ul

6-well   plate

200~400ul   per well

24-well   plate

100~200ul   per well

96-well   plate 

50~100ul   per well

2.悬浮细胞,计数,并收集5×106 个细胞,600g 离心5分钟,尽量吸尽上清,用预冷的PBS重悬细胞,600g 离心5分钟收集细胞,尽量吸尽上清,加入0.5ml的预冷的裂解液,用移液器吹打数下,冰上孵育30分钟, 10000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。


对于组织:

注意:取适当量的裂解液,放与4℃预冷,使用前数分钟内需加入酶抑制剂。

1. 手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中,漂洗数次,洗净组织血迹,用滤纸吸干组织表面液体,将组织切成几个较小的组织块。

2. 称量组织,按组织净重(g):裂解液(ml)=1:10的比例,加入相应体积的裂解液进行匀浆 ,(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。

3. 匀浆器匀浆,肉眼观察无明显组织块,冰上孵育30分钟。

4. 10000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。

 

结果实例:    

         M    N                    M    N                      M     N     

1.png  2.png  3.png        

          DSG3                     HSP90                     PCNA

M:Hela Cells  N:A549 Cells

如图:增强型RIPA裂解液提取细胞蛋白,BCA测定蛋白浓度,上样20ug,电泳,转膜,孵育博士德一抗,应用博士德ECL发光液显色。

故障排除:

问题

原因

解决办法

总蛋白量低

有些细胞较难裂解

确保细胞沉淀完全悬浮在增强型RIPA缓冲液中并孵化更长的时间,超声波处理以增加产量

蛋白浓度低

裂解液用量多

减少裂解液的用量

蛋白水解

没有加入蛋白酶抑制剂

加入蛋白酶抑制剂

磷酸化蛋白量少

磷酸酶活性高

加入磷酸酶抑制剂

 


Related products

蛋白抽提:
1、哺乳动物组织蛋白抽提试剂

产品简述:蛋白抽提试剂,AR0101-10,AR0101-30,AR0101-100

  • 产品货号
  • 产品名称
  • 规格
  • 价格
2、培养细胞总蛋白抽提试剂

产品简述:蛋白抽提试剂,AR0103-10,AR0103-30,AR0103-100

  • 产品货号
  • 产品名称
  • 规格
  • 价格