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NP-40裂解液/IP细胞裂解液

NP-40裂解液

分类:

免疫印迹检测系统 - 蛋白抽提

说明书:

AR0107

198元/100ml  

WB,IP,Co-IP

WB辅助试剂

现货

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Product Brief

  • 产品概况

    产品货号AR0107
    产品名称NP-40裂解液
    价格规格¥198/100ml
    保存条件4℃保存,一年有效。
    产品简介IP细胞裂解液是一种比较温和的裂解液,温和配方有助于维持蛋白复合物及蛋白完整构象。IP细胞裂解液的主要成分为25mM Tris(pH7.4),150mM NaCl,1% NP-40等。
    产品特点

    1.裂解缓冲液能有效地增溶细胞蛋白,但不释放基因组DNA或破坏蛋白质复合物。

    2.此裂解液能有效兼容许多应用,包括pull-down,Elisa,免疫沉淀,免疫共沉 淀,免疫印迹,报告分析,蛋白纯化,BCA蛋白定量等。 

    3.该裂解液不包含蛋白酶和磷酸酶抑制剂,如果需要,需自行准备。


Instructions

材料需要:蛋白酶和磷酸酶抑制剂

2ml离心管

组织研磨器

能达到13000g的离心机

注意事项:

1.抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

2.裂解得到的蛋白样品,含有较高浓度的去垢剂干扰,不建议用Bradford 法测定蛋白浓度,可以选用BCA蛋白定量试剂盒(博士德产品货号为AR0146,AR1110)测定蛋白浓度。

3.本试剂能提取大部分经常研究的蛋白质抗原,但对于大分子多聚抗原则无效。

使用方法:

取适量裂解液,在使用前数分钟内加入酶抑制剂。

对于细胞样品:

1.对于贴壁细胞,培养好的细胞吸去培养液后,加入预冷的PBS洗两次,加入适量提取试剂(试剂用量见下表格),用移液器吹打数下,把细胞吹散,冰上裂解10分钟。充分裂解后,将裂解物移入预冷的微型离心管中,4℃,13000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。

板规格/表面积

试剂用量

100×100mm                      

500~1000ul

100×60mm

250~500ul

6-well   plate

200~400ul   per well

24-well   plate

100~200ul   per well

2.对于悬浮细胞,离心(1000g,5min)收集细胞,用预冷的PBS洗两次,离心(1000g,5min),收集细胞,,加入适量裂解液, 每100万个细胞加入100ul的裂解液。用移液器吹打数下,把细胞吹散,冰上裂解10分钟,期间拿出涡旋震荡数次,充分裂解细胞。充分裂解后,4℃,13000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。

对于组织样品:
1.把组织剪切成细小的碎片。
2.按照每0.1g组织加入1ml裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
3.用玻璃匀浆器匀浆,冰上裂解10分钟,直至充分裂解。
4.充分裂解后,13000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。

故障排除:

问题

可能原因

解决办法

蛋白总含量低

一些细胞比其他细胞更难溶解

充分悬浮细胞沉淀,延长裂解时间,增加涡旋振荡次数

蛋白浓度低

加入过多的裂解缓冲液

减少裂解缓冲液的用量

蛋白水解

没有加入蛋白酶抑制剂

加入蛋白酶抑制剂

没有磷酸化蛋白

没有加入磷酸酶抑制剂

加入磷酸酶抑制剂

 


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