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超敏ECL化学发光即用型底物

ECL化学发光底物

分类:

免疫印迹检测系统 - 蛋白检测

说明书:

AR1172

398元/100mlX2  

WB

WB辅助试剂

现货

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Product Brief

  • 产品概况

    产品货号AR1172
    产品名称超敏ECL化学发光即用型底物
    价格规格¥398/100ml工作液(可用于2000cm2的膜)

    溶液 A      100ml         

    溶液 B      100ml 

    保存条件4℃密封避光保存,一年有效
    产品说明

    博士德生产的超敏ECL化学发光试剂盒,是一款具有超高灵敏度的化学发光(ECL)底物,可与二抗上耦连的辣根过氧化物酶发生化学反应,发出荧光,从而可以通过用X光片压片或CCD成像仪检测样品, 当底物与优化的抗体浓度和封闭缓冲液配合使用时,可检测到常规ECL底物无法检测的低丰度靶蛋白。

    产品特点

    1.用于辣根过氧化物酶(HRP)的化学发光底物

    2.使用适当的一抗和二抗时,可在NC膜或PVDF膜上检测丰度为低皮克级的蛋白条带

    3.所得信号的可定量检测范围跨越两个数量级

    4.通过胶片或成像系统进行曝光,易于捕获图像

    5.试剂盒组分能够在4℃条件下稳定放置一年

    6.配方经过优化,可适用于浓度极低的抗体检测

    注意事项

    1.A液和B液吸取过程中必须更换移液器枪头,避免相互污染失效。

    2.A液和B液混合为工作液后,需避免强氧化剂如次氯酸钠等对工作液的影响。

    3.须确保试剂瓶干净,无微生物或其它试剂污染。

    4.为了您的安全,请穿实验服并佩戴一次性手套。


Instructions

重要产品信息:

好的免疫印迹结果需要优化实验条件,包括样品量,凝胶类型,转移方法,膜类型,封闭剂,洗涤缓冲液,一抗浓度,二抗浓度和孵育时间等。

1.为获得最佳效果,在孵育步骤中使用摇床。

2.不要使用叠氮化钠作为缓冲液的防腐剂,因为它会抑制HRP。

3.始终戴上手套或使用干净的塑料镊子。金属装置必须没有可见的生锈痕迹,这可能导致斑点和/或高背景。

4.工作液暴露在阳光下或任何其他强光下都可能损害工作液使用效果。

5.由于阻断剂与抗体的交叉反应性引起非特异性信号,所以实验测试对于确定每种蛋白质印迹系统的适当封闭剂是至关重要的。阻止缓冲区也会影响系统的灵敏度。

6.当使用抗生物素蛋白/生物素系统时,避免使用牛奶作为阻断剂,因为牛奶含有不同量的内源性生物素,导致高背景信号。

7.使用足够量的洗涤缓冲液,封闭缓冲液,抗体溶液和底物工作溶液来覆盖印迹并确保其永不变干。使用大的封闭和洗涤缓冲液体积可以使非特异性信号最小化。

8.将Tween-20洗涤剂(终浓度为0.05-0.1%)加入到封闭缓冲液和所有稀释的抗体溶液中,以减少非特异性信号。

需要材料:

NC膜或PVDF膜

X射线胶片或成像系统

摇床

洗涤缓冲液:含有0.05-0.1%吐温20的洗涤液,PBS:10mM磷酸钠,150mM NaCl,pH7.2

TBS:10mM Tris,150mM NaCl,pH7.4

特异性的一抗,用洗涤缓冲液或封闭缓冲液稀释

HRP标记的二抗,特异性针对一抗,用洗涤缓冲液或封闭缓冲液稀释

封闭液:洗涤缓冲液中1-5%(w / v)封闭剂(例如酪蛋白,BSA或脱脂奶粉)

注意:博士德的ECL底物与所有封闭缓冲液兼容

使用说明:

1.室温封闭膜60分钟,同时摇动。

2.去除封闭液并添加一抗。在室温振荡培养1小时或在2-8℃过夜振荡。

3.将膜悬浮于清洗缓冲液中摇动5分钟以上。更换清洗缓冲液至少4-6次。增加洗涤缓冲液体积,洗涤次数和洗涤持续时间可能有助于使背景信号最小化。

4.在室温下孵育二抗1小时,同时摇动。

5.重复步骤3,去除未结合的HRP结合物。

注意:与HRP结合物孵育后,膜必须彻底清洗。

6.通过混合等量的检测试剂A和B来制备底物工作溶液。每平方厘米膜使用0.1mL工作溶液。

7.在室温下用工作液孵育印迹膜1-2分钟。

8.将印迹膜放在透明的保鲜膜或保护膜中。使用吸收性的纸巾去除多余的液体,小心地将气泡压出。

9.将印迹膜放在X光胶片或成像系统上显色。底物孵育后的30分钟内,发光最强烈。

疑难解答:

膜整个面都发光

酶标二抗量过多

减少二抗的浓度

膜上有棕色或黄色带

发光时间短

低信号或无信号

抗原或抗体量不足

减少二抗的浓度

转印失败

优化转印

二抗或底物活性低

更换二抗或底物

高背景

二抗浓度过高

降低二抗的用量

封闭不够充分

优化封闭

封闭液使用不当

更换质量更好的封闭液

洗涤不够充分

增加洗涤时间和次数

抗原或抗体浓度过高

降低抗原或抗体的用量

抗体特异性差

更换质量更好的抗体

条带里有斑点

无效的蛋白转移

优化转印

不均匀的膜

更换质量更好的膜

转印过程中膜胶之间有气泡

小心的赶出气泡

膜上有斑点

封闭液不均匀

过滤封闭液

非特异性的条带

HRP标记的二抗浓度过高

降低二抗的用量

SDS引起的蛋白非特异性结合

不使用SDS

抗体特异性差

更换质量更好的抗体

封闭不充分

优化封闭


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