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Bradford蛋白浓度测定试剂盒

蛋白定量试剂盒

分类:

免疫印迹检测系统 - 蛋白定量

说明书:

AR0145

90元/Kit  

WB

WB辅助试剂

现货

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Product Brief

  • 产品概况

    产品货号AR0145
    产品名称Bradford蛋白浓度测定试剂盒
    价格规格

    ¥90/Kit(Bradford 染色液 100ml;BSA标准品 20ml(2mg/ml))

    保存条件4℃保存,一年有效。
    产品描述应用试管法可以测量100管,微孔板法可以测量400孔
    产品说明Bradford蛋白浓度测定法是目前常用的灵敏度较高的蛋白浓度测定方法之一。它是根据Bradford染液(考马斯亮蓝G-250染料)与蛋白结合,使染料的最大吸收峰从A456变为A595,且测定的吸光值与蛋白浓度成正比关系的原理设计的。本法通过吸光值,推算蛋白浓度,实现了蛋白浓度测定的快速性和简便性。灵敏度高,比Lowry法大约高四倍,最低蛋白检测量可达1μg。测定速度快、简单,仅需一种试剂即可,且不受大多数样品中化学试剂的影响。
    注意事项

    1. 各取样操作应准确无误。

    2. 在100~1500μg/ml的浓度范围线性最佳。 

    3. 加入样品后的试剂,混合均匀后,静置反应,测量过程中切不要再次剧烈晃动。 

    4. Bradford染色液使用前,应充分混匀。同时,酶标仪需预热20min。 

    5. Bradford染色液需恢复到室温再使用,有利于提高检测的灵敏度。 

    6. 每次试验都必须建立标准曲线。另外,为了得到更精确的结果,每个蛋白梯度和样品均需做复孔。 

    7. Bradford法测定蛋白浓度对大多数化学物质的兼容性比较好,比如对还原剂DTT的兼容性高达5mM。但会 受到略高浓度的去垢剂影响,如,SDS需低于0.01%,Triton X-100低于0.05%,Tween 20/ 60/80低于0.015% 等。(详情见附录)对于含去垢剂的样品,建议使用BCA蛋白定量检测试剂盒。


Instructions

一、配制BSA标准品

标准品稀释液为蛋白样品的溶解液,原则上蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。

BSA标准品体系配制可参考下表。

Vial

稀释液体积(μl)

2mg/ml BSA体积(μl)

BSA终浓度(μg/ml)

A

0

100

2000

B

25

75

1500

C

50

50

1000

D

125

75

750

E

150

50

500

F

350

50

250

G

375

25

125

H

395

5

25

I

400

0

0=Blank(空白孔)

二、检测方法

A. 试管法检测(线性范围:100-1500μg/ml)

1.各取20μl不同浓度标准品和待测样品加入到反应管中;

2.加入1ml Bradford染色液,混匀。室温孵育10min。

3.分光光度计上测定595nm处的吸光度,用装满水的比色皿对仪器校零。之后测定所有样本浓度。

4.根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度μg/ml;Y-最终的OD595nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

B. 标准微孔板检测(线性范围:100-1500μg/ml)

1.各取5μl各浓度标准品和待测样品加入到微孔板中;

2.每孔加入250μl Bradford染色液,振荡30s充分混匀。盖上微孔板,室温孵育10min。

3.酶标仪上测定595nm处的吸光度。或者其他575~615nm波长范围内的吸光度,但是相对于595nm,吸光度会存在~10%的损失。

4.根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度μg/ml;Y-最终的OD595nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

注意:由于酶标板的光径比比色皿短,经酶标板检测得到的OD595nm会低于比色皿检测所得,因此可能降低本法的检测下限。要得到更高的OD595nm,可使用7-10μl标准品/待检样本,和250μl Bradford染色液来进行检测。

 

附录 :蛋白浓度测定的兼容性

名称(盐/缓冲液)

耐受浓度

ACES, pH 7.8

100mM

Ammonium sulfate

1M

Asparagine

10mM

Bicine, pH 8.4

100mM

Bis-Tris, pH 6.5

100mM

Borate (50mM), pH 8.5

undiluted

Calcium chloride in TBS, pH 7.2

10mM

Na-Carbonate/Na-Bicarbonate (0.2M), pH 9.4

undiluted

Cesium bicarbonate

100mM

CHES, pH 9.0

100mM

Na-Citrate (0.6M), Na-Carbonate (0.1M), pH 9.0

undiluted

Na-Citrate (0.6M), MOPS (0.1M), pH 7.5

undiluted

Cobalt chloride in TBS, pH 7.2

10mM

EPPS, pH 8.0

100mM

Ferric chloride in TBS, pH 7.2

10mM

Glycine

100mM

Guanidine•HCl

3.5M

HEPES, pH 7.5

100mM

Imidazole, pH 7.0

200mM

MES, pH 6.1

100mM

MES (0.1M), NaCl (0.9%), pH 4.7

undiluted

MOPS, pH 7.2

100mM

Nickel chloride in TBS, pH 7.2

10mM

PBS; Phosphate (0.1M), NaCl (0.15M), pH 7.2

undiluted

PIPES, pH 6.8

100mM

RIPA lysis buffer; 50mM Tris, 150mM NaCl,0.5%   DOC,1% NP-40, 0.1% SDS, pH 8.0

1/10 dilution*

Sodium acetate, pH 4.8

180mM

Sodium azide

0.5%

Sodium bicarbonate

100mM

Sodium chloride

5.0M

Sodium citrate, pH 4.8 or pH 6.4

200mM

Sodium phosphate

100mM

Tricine, pH 8.0

100mM

Triethanolamine, pH 7.8

100mM

Tris

2M

TBS; Tris (25mM), NaCl (0.15M), pH 7.6

undiluted

Tris (25mM), Glycine (192mM), pH 8.0

undiluted

Tris (25mM), Glycine (192mM), SDS (0.1%), pH 8.3

1/2 dilution*

Zinc chloride in TBS, pH 7.2

10mM

 

名称(变性剂)

耐受浓度

还原剂以及巯基试剂

耐受浓度

Brij™-35

0.125%

Dithiothreitol (DTT)

5mM

Brij-56, Brij-58

0.031%

Glucose

1M

CHAPS, CHAPSO

5.0%

Melibiose

100mM

Deoxycholic acid

0.05%

2-Mercaptoethanol

1M

Lubrol™ PX

0.125%

Potassium thiocyanate

3M

Octyl β-glucoside

0.5%

Thimerosal

0.01%

Nonidet P-40 (NP-40)

0.5%

Misc. Reagents &   Solvents

耐受浓度

Octyl β-thioglucopyranoside

3.0%

Acetone

10%

SDS

0.125%

Acetonitrile

10%

Span™ 20

0.5%

Aprotinin

10mg/L

Triton™ X-100, X-114

0.125%

DMF, DMSO

10%

Triton X-305, X-405

0.5%

Ethanol

10%

Tween™-20

0.062%

Glycerol (Fresh)

10%

Tween-60

0.1%

Hydrochloric Acid

100mM

Tween-80

0.062%

Leupeptin

10mg/L

Zwittergent™ 3-14

0.025%

Methanol

10%

螯合剂

耐受浓度

Phenol Red

0.5mg/mL

EDTA

100mM

PMSF

1mM

EGTA

2mM

Sodium Hydroxide

100mM

Sodium citrate

200mM

Sucrose

10%

还原剂以及巯基试剂

耐受浓度

TLCK

0.1mg/L

N-acetylglucosamine in PBS, pH 7.2

100mM

TPCK

0.1mg/L

Ascorbic acid

50mM

Urea

3M

Cysteine

10mM

o-Vanadate (sodium salt), in PBS,   pH 7.2

1mM

Dithioerythritol (DTE)

1mM



 


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