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BCA蛋白定量试剂盒

蛋白质定量试剂盒

分类:

免疫印迹检测系统 - 蛋白定量

说明书:

AR0146

260元/Kit

WB

WB辅助试剂

现货

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Product Brief

  • 产品概况

    产品货号AR0146
    产品名称BCA蛋白质定量试剂盒
    价格规格¥260/Kit
    测量次数应用试管法可以测量50管,微孔板法可以测量500孔
    保存条件室温保存,一年内有效。
    产品说明碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+, Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物,吸光强度与蛋白浓度成正比。测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。
    1.准确灵敏,线性范围广,BCA试剂的蛋白质测定范围是20-2000ug/ml。
    2.快速:45分钟内完成测定。
    3.经济实用:在微孔板中进行测定,可大大节约样品和试剂用量。
    4.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。
    5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
    注意事项1.在低温条件或长期保存出现沉淀时,可搅拌或37℃温育或微波几十秒使溶解, 如发现细菌污染,则应丢弃。
    2.BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保EDTA低于10mM,无EGTA,二硫苏糖醇(DTT)低于1mM,β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。不适用BCA法时请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒(博士德货号为AR0145)。高浓度的去垢剂也影响实验结果,可用TCA沉淀去除干扰物质。
    3.要得到更为精确的蛋白浓度结果,每个蛋白梯度和样品均需做复孔且标准品与样品处理要尽量一样(如采用同样的溶液溶解样品和标准品), 每次均应做标准曲线。
    4.当试剂A和B混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失。
    5.需准备37℃水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计,测定波长为540-595nm之间,562nm最佳。酶标仪需与96孔酶标板配套使用。使用分光光度计测定蛋白浓度时,试剂盒测定的样品数量会因此而减少。使用温箱孵育时,应注意防止因水分蒸发影响检测结果。


Instructions

试管法
1.配制工作液: 根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积 BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液,充分混匀。注意:工作液需临用前配置。
2.稀释标准品:将标准品储存液稀释至25~2000ug/ml。稀释液可用生理盐水或PBS。

3.将0.1ml的标准品和样本分别加入试管中。
4.各管加入2ml BCA工作液,37℃放置30分钟(增加孵育时间和温度能够增加562nm的吸光度值和检测最低浓度,降低测量范围)。
5.冷却到室温,(BCA不会达到真正的反应终止点,当冷却到室温时颜色依然会产生。但是在室温下颜色产生的效率非常低,在冷却后10分钟内测量完所有试管则无影响)用分光光度计测定A562,根据标准曲线计算出蛋白浓度。微孔板法
配制工作液(同上)。注意:工作液需临用前配置。
稀释标准品:将标准品储存液稀释至25~2000ug/ml。稀释液可用生理盐水或PBS。

1.将25ul的标准品和合适浓度范围的样本分别加入96孔板的微孔中。
2.各孔加入200ul BCA工作液,充分混匀。
3.盖上96孔板盖,37℃孵育30分钟(增加孵育时间和温度能够增加562nm的吸光度值和检测最低浓度,降低测量范围)。
6.冷却到室温(BCA不会达到真正的反应终止点,当冷却到室温时颜色依然会产生。但是在室温下颜色产生的效率非常低,在冷却后10分钟内测量完所有试管则无影响),用酶标仪测定A562,根据标准曲线计算出蛋白浓度。

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