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BCA蛋白浓度测定试剂盒(500次)

蛋白质定量试剂盒

分类:

免疫印迹检测系统 - 蛋白定量

说明书:

AR0146

260元/kit  

WB

WB辅助试剂

现货

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Product Brief

  • 产品概况

    产品货号AR0146
    产品名称BCA蛋白浓度测定试剂盒
    价格规格

    ¥260/Kit/500次

    A液               100ml 

    B液                5ml

    蛋白标准品     20ml(2mg/ml)

    测量次数应用试管法可以测量50管,微孔板法可以测量500孔
    保存条件室温保存,一年内有效。
    产品说明

    碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+, Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物,吸光度强度与蛋白浓度成正比。测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。

    1.准确灵敏,线性范围广,BCA试剂的蛋白质测定范围是20-2000ug/ml。

    2.快速:45分钟内完成测定。

    3.经济实用:在微孔板中进行测定,可大大节约样品和试剂用量。

    4.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。

    5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。

    注意事项

    1.低温或长期保存,若发现BCA试剂A或者试剂B有沉淀发生,请37?C温育并伴随搅拌促使其充分溶解。如发现细菌污染,则应丢弃,避免对实验结果造成影响。

    2. 不受大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20,60,80等。(详情见附录)

    3每次测量蛋白浓度均应做标准曲线。

    4.当试剂A和B混合时会有浑浊,混匀后就会消失。

    5.需准备37℃水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计,测定波长为540-595nm之间,562nm最佳。酶标仪需与96孔酶标板配套使用。使用分光光度计测定蛋白浓度时,试剂盒测定的样品数量会因此而减少。使用温箱孵育时,应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

    6.使用BCA蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应的速度和温度有关,因此需注意保持定时和定温,以确保精确定量。

    7.实验操作规范,提高上样量的精确度。


Instructions

一. 配制BSA标准品

注:标准品稀释液为蛋白样品的溶解液,原则上蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。

BSA标准品配制可参照下表(微孔板检测,线性范围20-2000μg/ml)

管号

稀释液体积(μl)

2mg/ml BSA体积(μl)

BSA终浓度(μg/ml)

A

0

100

2000

B

25

75

1500

C

50

50

1000

D

125

75

750

E

150

50

500

F

350

50

250

G

375

25

125

H

395

5

25

I

400

0

0=Blank(空白孔)

如用试管法检测,每管需加100μl标准品,按3个重复计算,每个浓度至少需配制300μl。

二.配制BCA工作液

A.计算所需要的BCA工作液体积。

BCA工作液体积=(标准品+待测样品)×重复数×每个样品所需要的BCA工作液

注意:试管法检测时每个样品加2.0ml BCA工作液,微孔板检测每个样品加200μl BCA工作液。

B.配制BCA工作液:50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂B(A:B=50:1),充分混匀。

注意:BCA试剂B加入BCA试剂A中后,迅速浑浊,通过混匀后立即变澄清。BCA工作液装入密封容器内,室温条件24h稳定。

三.试管法(样品:BCA工作液=1:20)

1.各取100μl标准品和待测样品加入到反应管中。

2.每管加入2.0ml BCA工作液,混匀,37℃孵育30min。

注意:也可室温孵育2h,或者60℃孵育30min。BCA检测蛋白浓度,延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应。但是温度升高和时间延长会降低检测下限,以及降低工作线性范围。

3.冷却到室温。在分光光度计上进行检测,设定波长为562nm。用装满水的比色皿对仪器校零。然后在10分钟内对所有样品读数。

注意:由于BCA反应达不到真正的反应终点,即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是,由于室温下生色比率相当低,因此若是10min内能对所有的样本进行562nm吸光度的测试,不会导致明显错误。

4.根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度ug/ml;Y-最终的OD562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

四.微孔板法(样品:BCA工作液=1:8)

1.各取25μl标准品和待测样品加入到微孔板中。

注意:样品与工作液比例为1:8,若样品有限,可使用10μl标准品和待检测样品进行检测(即1:20),这时试剂盒的检测范围为125-2000μg/ml。

2.每孔加入200μl BCA工作液,振荡30s充分混匀。盖上微孔板,37℃孵育30min。

3.冷却到室温,在酶标仪上的540~595nm波长范围处检测吸光度,其中562nm波长为最佳。

注意:延长孵育时间或者提高(样品:BCA工作液比)会增高每个孔的OD562nm净值,并且降低检测下限和工作线性范围。

4.根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度ug/ml;Y-最终的OD562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

 

附录:BCA蛋白浓度测定的兼容性 

名称

耐受浓度

Sodium bicarbonate  

100 mM

Sodium   phosphate    

25 mM

2-Mercaptoethanol 

0.01%

Glycercol (pure) 

10%

Glycine-HCl, pH 2.8 

100 mM

HEPES 

100 mM

Hydrochloric acid 

100 mM

Leupeptin

10 mg/L

Nickel chloride (in TBS, pH8.0)

10 mM

Nonidet P-40 (NP-40) 

5% (w/v)

Octyl β   -glucoside

5% (w/v)

Potassium thiocyanate

3.0 M

SDS  

5%

Sodium acetate, pH 4.8  

200 mM

Sodium azide

0.20%

Sodium hydroxide  

100 mM

Sucrose  

40%

Triton X-100  

5%

Triton X-114, X-305,X-405

1%

Tween-20, Tween-60, Tween-80

5%

Zwittergent

1%

ACES, pH 7.8 

25 mM

Acetone  

10%

Acetonitrile   

10%

Ammonium sulfate  

1.5 mM

Aprotinin

10 mg/L   

Bicine, pH 8.4  

20 Mm

Bis-Tris, pH 6.5   

33 mM

Borate, pH 8.5   

50 mM

Brij-35

5%

Brij-52

1%

Brij-56, Brij-58

1%

BugBuster protein Extraction   Reagent

no interference (undiluted)

 

<td width="325" valign="bottom" style="border-right-width: 1px; border-bottom-width: 1px; border-left-width: 1                        

<td width="227" valign="bottom" style="border-top: none; border-left: none; border-bottom-width: 1px; border-bottom-color: windowtext; border-right-width: 1px; border-ri                        

Calcium chloride (in TBS, pH 8.0)

10 mM

CelLytic B Reagent

no interference (undiluted)

Cesium   bicarbonate   

100 mM

CHAPS  

5%

Cobalt chloride (in TBS, pH   8.0) 

0.8 mM

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