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亚细胞结构胞浆和胞核蛋白提取试剂盒

蛋白提取试剂盒

分类:

免疫印迹检测系统 - 蛋白抽提

说明书:

AR0106

300元/Kit

WB

WB辅助试剂

现货

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Product Brief

  • 产品概况

    产品货号AR0106
    产品名称蛋白抽提-亚细胞结构胞浆和胞核蛋白提取试剂盒
    价格规格¥300/Kit
    主要成分胞浆提取试剂(CER) 30ml
    胞核提取试剂(NER) 5ml
    保存条件4℃保存,一年有效。
    使用说明博士德细胞胞浆和胞核蛋白提取试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提胞浆和胞核蛋白的方法。抽提得到的蛋白为非变性型,有活性,可以用于后续操作。本试剂盒是通过在低渗透压条件下,使细胞充分膨胀后破坏细胞膜,释放出细胞浆蛋白,然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。
    注意事项:1.抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
    2.对于组织样品,本试剂盒仅适合于新鲜组织,对冻存过的组织抽提效果不是很理想。
    3.建议使用BCA蛋白定量试剂盒测蛋白浓度。(博士德产品货号为AR0146)。


Instructions

溶液准备:取出胞浆提取试剂(CER)和胞核提取试剂(NER)置于冰上,使用前根据需要加入蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂(酶抑制剂可向博士德订购,产品货号为AR1182,AR1183)。
对于细胞样品:
1.贴壁细胞: 去除培养液,用预冷的 PBS 洗一遍,用细胞刮刮下细胞(最好不用胰酶消化,会降解蛋白)。500g 离心2~3 分钟收集细胞,尽量吸尽上清,留下细胞沉淀备用。
2.悬浮细胞:500g 离心2~3 分钟收集细胞,去除培养液,加入适量的预冷的PBS洗一遍细胞, 再次500g 离心2~3 分钟收集细胞,尽量吸尽上清,留下细胞沉淀备用。
4.迅速地将沉淀的细胞重悬于胞浆提取试剂(CER)中(约为5-10倍的细胞湿体积),剧烈振荡混匀15秒,使细胞完全悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开,可以适当延长振荡混匀时间)。放置在冰上孵育10-15分钟。
5.高速剧烈振荡混匀5 秒,4℃ 12000~16000g 离心10分钟。
6.立即吸取上清至一预冷的塑料管中,即为抽提得到的细胞浆蛋白。可进行后续的Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。(千万不要触及沉淀,可以在沉淀上方保留极小体积的上清,以免触及沉淀。)
7.完全吸尽残余的上清,加入2倍体积的胞核提取试剂(NER),上清尽量去净,避免细胞浆蛋白污染。
8.高速剧烈振荡混匀15 秒,使沉淀完全悬浮并分散开。然后放回冰浴中孵育20-30分钟,期间每隔5分钟再拿出来剧烈振荡混匀10~20 秒, 4℃12000~16000g 离心10 分钟。
9.立即吸取上清至一预冷的塑料管中,即为抽提得到的细胞核蛋白。
对于组织样品:
1.把组织称重后,把组织尽可能切成非常细小的碎片,按每0.1克组织加入1毫升胞浆提取试剂(CER)的比例加入提取试剂,在匀浆器中匀浆,在冰上操作,匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内,冰浴放置10-20分钟。接步骤5.

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