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培养细胞总蛋白抽提试剂

蛋白抽提试剂,AR0103-10,AR0103-30,AR0103-100

分类:

免疫印迹检测系统 - 蛋白抽提

说明书:

AR0103

38元/10ml88元/30ml198元/100ml

WB

WB辅助试剂

现货

总价格:

---元*1

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- +

Product Brief

  • 产品概况

    产品货号AR0103
    产品名称培养细胞总蛋白提取试剂
    价格规格¥38/10ml;¥88/30ml;¥198/100ml
    保存条件4°C一年有效。
    产品描述
    对于5×106个细胞的抽提样品,本样品可以抽提200次,本产品可在60分钟的时间内完成蛋白的提取。
    需要材料

    蛋白酶和磷酸酶抑制

    剂2ml离心管

    能达到10000g的离心机

    细胞刮

    产品说明博士德的哺乳动物细胞蛋白抽提试剂用于从培养的哺乳动物细胞中高效抽提总可溶性蛋白。这款完整的细胞裂解试剂是一种非变性除垢剂配方,可在30分钟内溶解细胞膜并抽提总可溶性细胞蛋白。这种哺乳动物细胞裂解试剂可以不需要从培养皿上剥离贴壁细胞,可以简单而直接地在生长细胞的24孔和96孔板上进行裂解和分析。与很多下游分析都兼容,包括免疫分析、酶分析和各种常见的报告基因分析。


Instructions

注意事项:

1.温和的除垢剂裂解,产生的抽提物直接与BCA蛋白定量分析试剂或SDS-PAGE兼容。

2.抽提的可溶性蛋白处于非变性状态,可直接用于免疫沉淀反应和其他亲和纯化过程。

3.可透析,确保其与随后的分析系统兼容。

4.贴壁细胞可直接在板上裂解。

5.试剂已在几种不同类型的细胞系上进行了测试,包括COS-7,NIH3T3,Hepa1-6,293T,CHO等细胞。

6.蛋白质提取效率通常比冻融法和超声波法高。

7.抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

 

使用方法:

注意:取适当量的裂解液,放与4℃预冷,使用前数分钟内需加入酶抑制剂。

1.对于贴壁细胞,细胞刮刮下细胞,计数,并收集5×106 个细胞,600g 离心5分钟,尽量吸尽上清,用预冷的PBS重悬细胞,600g 离心分钟收集细胞,尽量吸尽上清,加入0.5ml的预冷的裂解液,用移液器吹打数下,冰上孵育30分钟, 10000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。

注意:可以直接将裂解液加入培养细胞的器皿中裂解细胞,具体操作如下,

A.用移液枪小心吸去培养液,

B.加入适量的预冷的PBS,

C.用移液枪小心吸去PBS,

D.按照下表加入裂解液,4℃孵育30分钟。

E.将裂解液转入离心管中, 10000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。

板规格/表面积

试剂用量

100mm                      

500~1000ul

60mm

250~500ul

6-well   plate

200~400ul   per well

24-well   plate

100~200ul   per well

96-well   plate 

50~100ul   per well

 

2.对于悬浮细胞,计数,并收集5×106 个细胞,600g 离心5分钟,尽量吸尽上清,用预冷的PBS重悬细胞,600g 离心5分钟,尽量吸尽上清,加入0.5ml的预冷的裂解液,用移液器吹打数下,冰上孵育30分钟, 10000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。

常见问题:         

问题 

原因

解决方法

 

 

低蛋白的产出

蛋白表达低

转染步骤再优化

试剂量不足

加入更多试剂

试剂不能渗透细胞膜

增加抽提时间,在抽提时摇动用力些


 

结果实例1:

1.png

如图:细胞提取试剂提取不同细胞的蛋白,BCA测定蛋白浓度,上样20ug,跑胶,转膜,孵育博士德一抗,使用博士德发光显色液显影。

 

结果实例2:

 2.png


依照本说明书操作,使用不同细胞得到的蛋白量。


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